GB 5009.243-2016 食品安全国家标准 高温烹调食品中杂环胺类物质的测定检测标准

　　1.范围
　　本标准规定了高温烹调食品中2-氨基-3,4-二甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(MeIQ),2-氨基-3,8-二甲基咪唑并[4,5-f]喹啉( MeIQx),2-氨基-3,4,8-三甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(4,8- DiMeIQx),2氨基-3,7,8-三甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(7,8- DiMeIQx),2-氨基-1-甲基-6-苯基-咪唑并[4,5-b]吡啶(PhIP)等杂环胺的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
　　本标准适用于烤鱼、烤肉及其制品中MeIQ、MeIQx、4,8- DiMeIQx、7,8- DiMeIQx、PhIP的测定。
　　2.原理
　　试样采用氢氧化钠/甲醇溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱检测,内标法定量。
　　3.试剂和材料
　　除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
　　3.1 试剂
　　3.1.1 氢氧化钠。
　　3.1.2 乙酸铵:纯度≥98%。
　　3.1.3 甲醇:色谱纯。
　　3.1.4 乙醇:色谱纯。
　　3.1.5 正己烷:色谱纯。
　　3.1.6 二氯甲烷:色谱纯。
　　3.1.7 乙腈:色谱纯。
　　3.1.8 冰乙酸:色谱纯。
　　3.2 试剂配制
　　3.2.1 氢氧化钠溶液(40g/L):称取40.0g氢氧化钠,用水溶解并定容至1L。
　　3.2.2 氢氧化钠溶液(4g/L):量取40g/L氢氧化钠溶液(3.2.1)50mL,加入450mL水,混合均匀。
　　3.2.3 40g/L氢氧化钠甲醇混合溶液(70十30,体积分数):量取40g/L氢氧化钠溶液(3.2.1)70mL,加入30mL甲醇,混合均匀。
　　3.2.4 4g/L氢氧化钠-甲醇混合溶液(45十55,体积分数):量取4g/L氢氧化钠溶液(3.2.2)45mL,加入55mL甲醇,混合均匀。
　　3.2.5 乙醇-二氯甲烷混合溶液(10+90,体积分数):量取10mL乙醇,加入90mL二氯甲烷,混合均匀。
　　3.2.6 乙腈水溶液(5+95,体积分数):量取5mL乙腈,加95mL水,混合均匀。
　　3.2.7 乙酸乙酸铵缓冲液:称取1.155g乙酸铵,用450mL水溶解,用乙酸调pH至5.0±0.5,加水定容至500mL。
　　3.2.8 乙酸缓冲液-乙腈混合溶液(50十50,体积分数):量取乙酸-乙酸铵缓冲液(3.2.7)50mL,加入50mL乙腈,混合均匀。
　　3.3 标准品
　　3.3.1 杂环胺标准物质:MeIQ(C12H12N4,77094-11-2)、 MeIQx(C11H11N5,77500-04-0)、4,8- DiMeIQx(C12H13N5,95896-78-9)、7,8- DiMeIQx(C12H13N5,92180-79-5)、PhIP(C13H12N4,105650-23-5),纯度均大于99%。
　　3.3.2 内标标准物质4,7,8- TriMeIQx(C13H15N5,132898-07-8),纯度大于99%。
　　3.4 标准溶液配制
　　3.4.1 杂环胺标准储备液:将MeIQ、MeIQⅹ、4,8- DiMeIQx、7,8- DiMeIQx、PhIP(3.3.1)分别用乙腈配制成浓度为10.0μg/mL的标准储备液。
　　3.4.2 内标储备液:将4,7,8- TriMeIQx(3.3.2)用乙腈配制成浓度为10.0μg/mL的标准储备液。
　　3.4.3 混合标准工作液:吸取杂环胺标准储备液(3.4.1)及内标储备液(3.4.2),乙腈-水溶液(3.2.6)稀释,得到杂环胺浓度分别为0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L,内标浓度为20.0μg/L的混合标准溶液。
　　3.4.4 内标工作液:吸取适量内标储备液(3.3.2),用乙腈配制成浓度为200μg/L的内标工作液。
　　3.5 材料
　　3.5.1 微孔滤膜:0.2μm,有机系。
　　3.5.2 苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱( Lichrolut EN或相当者,3mL,200mg)。
　　4.仪器与设备
　　4.1 液相色谱仪-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源。
　　4.2 电子天平:感量为0.01mg、1mg。
　　4.3 pH计:感量为0.01。
　　4.4 高速离心机,转速不低于10000r/min。
　　4.5 氮气浓缩仪。
　　4.6 固相萃取装置。
　　4.7 均质器。
　　4.8 旋涡振荡器。
　　5.分析步骤
　　5.1 试样制备
　　烤鱼、烤肉及其制品取可食部分,捣碎混匀,标识后-18℃冷冻保存。
　　5.2 试样处理
　　5.2.1 提取:称取试样2g(*到0.01g)于50mL离心管中,加入200μL内标工作液(3.4.4),再加入9.8mL 40g/L氢氧化钠-甲醇混合溶液（3.2.3），均质1min。均质期刀头分别用5.0mL 40g/L氢氧化钠-甲醇混合溶液（3.2.3）各洗涤两次，洗涤液合并至样品提取离心管中。试样在10000r/min条件下离心10min，待净化。