GB/T 22222-2008 食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的测定 高效液相色谱法检测标准

　　1.范围
　　本标准规定了食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖的高效液相色谱法测定的条件和详细分析步骤。
　　本标准适用于口香糖、糕点、糖果、饮料等食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇含量的测定。
　　本标准木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的*小检出限均为0.4%。
　　2.规范性引用文件
　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括
　　勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)
　　3.方法提要
　　试样经沉淀蛋白质和萃取脂肪后过滤,清液进高压液相色谱仪,经氨基色谱柱分离,外标法定量。
　　4.试剂和溶液
　　除非另有说明，所用试剂应为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
　　4.1 乙腈:色谱纯。
　　4.2 乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌,加3mL冰乙酸,加水溶解并稀释至1000mL。
　　4.3 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾,加水溶解并稀释至100mL。
　　4.4 石油醚:沸程30℃～60℃。
　　4.5 糖醇;纯度≥99%。
　　4.6 标准贮备液:分别称取1g(*至0.1mg)木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇标准,加入约25g水溶解，称量(*至0.1mg)，溶液每克分别相当于40mg木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇，放置4℃密封可贮藏一个月。
　　4.7 标准工作液：分别吸糖醇标准贮备液(4.6)1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶,称量(*至0.1mg),加水至刻度线,称量(*至0.1mg),分别相当于1.6mg/g、3.20mg/g、4.80mg/g、8.00mg/g浓度标准溶液。
　　5.仪器和设备
　　实验室常规仪器设备和以下各项。
　　5.1 高效液相色谱仪:具有示差折光检测器或相当的检测器。
　　5.2 色谱柱:氨基色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)或阳离子交换色谱柱(6.5mm×300mm)。
　　5.3 磁力搅拌器
　　5.4 离心机:4000r/min。
　　6.试样的制备
　　6.1 块状或颗粒状样品
　　取有代表性的样品至少200g,用粉碎机粉碎,置于密闭的容器内。
　　6.2 粉末状、糊状或液体样品
　　取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的容器内。
　　7.分析步骤
　　7.1 样品处理
　　7.1.1 脂肪含量小于10%的食品
　　称取均匀的食品样品5g～10g(m1,*至0.1mg),糖醇含量超过50%的食品称取量小于1g,于150mL带有磁力搅拌子的烧杯中,加水约50g溶解,缓慢加入乙酸锌溶液(4.2)和亚铁氰化钾溶液(4.3)各5mL,再加水至溶液总质量约为100g(m2,*至0.1mg),磁力搅拌(5.3)30min,放置室温后,用干燥滤纸过滤,取2mL滤液用0.45μm微孔滤膜过滤或离心获取清液至样品瓶,待色谱仪测定。
　　7.1.2 脂肪含量大于10%的食品
　　脂肪含量大于10%按以下步骤进行脱脂。称取均匀化的样品5g～10g(m1,*至0.1mg),置于100mL具塞离心管中,加入50mL石油醚(4.4),振摇2min,1800r/min离心(5.4)15min,去除石油醚,重复以上步骤至去除大部分脂肪。蒸发残留的石油醚,用玻璃棒将样品捣碎,将样品转移至150mL带有磁力搅拌子的烧杯中,用50g水分两次冲洗离心管,洗液并入烧杯,以下按7.1.1自“缓慢加人乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5mL”依法操作。
　　7.2 测定
　　7.2.1 色谱参考条件
　　a) 氨基色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
　　柱温:40℃;
　　流动相:乙腈-水(85+15,体积比);
　　流速:1.0mL/min;
　　进样量:20μL。
　　b) 阳离子交换色谱柱(6.5mm×300mm);
　　柱温:80℃;
　　流动相:水;
　　流速:0.5mL/min;
　　进样量:20μL。
　　7.2.2 标准曲线的绘制
　　分别吸取20μL标准工作液(4.7)注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
　　7.2.3 样品中糖醇的测定
　　取20μL样液(7.1)注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰面积),通过各个糖醇的色谱峰在色谱图中的保留时间,确认样品中的糖醇,根据峰面积由标准曲线上查得样液中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的含量,或利用回归方程式计算样液中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的含量。
　　8.结果计算
　　样品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇的含量以质量分数x计,数值以%表示，按式(1)计算: