SN/T 1198-2013 转基因成分检测 马铃薯检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了马铃薯及其加工产品中转基因成分检测的PCR方法和实时荧光PCR方法。
　　本标准的筛选检测适用于马铃薯及其加工产品中转基因成分的定性检测。
　　本标准的鉴定检测适用于马铃薯EH92-527-1实时荧光PCR的品系鉴定。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件对于本文件的应用是必不哥少的。凡是注日期的引用友件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
　　GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求
　　GB/T 19495.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法
　　GB/T 19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法
　　3 术语和定义
　　下列术语和定义适用于本文件。
　　3.1 转基因 transgene
　　将物种本身不具有的来源于其他物种的功能DA序列通过生物工程技术，使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。
　　3.2 内源基因 endogenous gene
　　在栽培的物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于对基因组中某一目的基因的定量分析。
　　3.3 外源基因 exogenous gene
　　利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。
　　3.4 阳性目标DNA对照 positive dNa target control
　　参照DNA或从可溯源的标准物质提取的DNA或从含有已知序列阳性样品(或生物)中提取的DNA。该对照用于证明测试样品的分析结果含有目标序列。
　　3.5 阴性目标DNA对照 negative DNa target control
　　不含外源目标核酸序列的DNA片段。可使用可溯源的阴性标准物质。
　　3.6 提取空白对照 extraction blank control
　　该对照为在DNA提取过程中，以水代替测试样品完成提取过程所有步骤，用以证明提取过程中没
　　有核酸污染。
　　以不同批次提取的DNA并进行多个PCR分析时，在做测试样品PCR时还应同时包括提取空白对照。
　　4 缩略语
　　下列缩略语适用于本文件。
　　AAD： resides outside T-dna
　　在转座自大肠杆菌Tn7中编码链霉素腺苷酰(基)转移酶的基因
　　ArabSSUlA： arabidopsis thaliana ribulose- 1，5-bisphosphate carboxylase( Rubisco )small subunit ats lA promoter
　　拟南芥( Arabidopsis thaliana)的核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶小亚基1A的启动子
　　CaMv35S： promoter from cauliflower mosaic virus
　　花椰菜花叶病毒35S启动子
　　CP4 EPSPS： 5-enolpyrulshikimate-3-phosphate synthase 5-enolpyrul shikimate-3-phosphate synthase
　　来源于农杆菌 Agrobacterium sp. Strain ce4的5-莽草酸-3-磷酸合成酶
　　cry 3A cry3a delta-endotoxin
　　由Bacillus thuringiensis subsp. Tenebrionis(B.T.T) strain bi256-82的蛋白。这个蛋白具有抗虫活性，尤其是可以选择性杀死科罗拉多马铃薯甲虫( Colorado potato beetle larvae)
　　CTAB： hexadecyl trimethyl ammonium bromide
　　十六烷基三甲基溴化铵
　　E9 3’ the 3， non-translated region of the pea ribulose-1， 5-bisphosphate carboxylase small subunit (rbcS)E9 gene
　　来源于豌豆的核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶E9基因小亚基3’端序列
　　EDTA： ethylene diamine tetraacetic acid
　　乙二胺四乙酸
　　FMV35S： a promoter derived from figwort mosaic virus
　　玄参花叶病毒35S启动子
　　NOS： nopaline synthase terminator
　　胭脂碱合成酶3’转录终止子
　　NPT-II： neomycin phosphotransferase-II
　　新霉素-3’-磷酸转移酶
　　oriV： resides outsideT-dna
　　一个源自农杆菌 Agrobacterium的RK2质粒的1.3kb的复制区域
　　ori332： resides outsideT-dna
　　一个源自pBR322质粒的1.8kb的片段，其中包含复制区域和转移结合位点bom
　　PLRVrep： potato leaf roll virus replicase
　　马铃薯卷叶病毒复制酶
　　PVYcp： potato Y virus coat protein
　　马铃薯Y病毒外壳蛋白
　　Tris： 2-amino-2-(hydroxymethyl)-1， 3-propanediol
　　羟甲基氨基甲烷
　　UGPase： UDP-glucose pyrophosphorylase
　　尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶
　　5 防污染措施
　　检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T 19495.2 中的规定执行。
　　6 抽样与制样
　　6.1 抽样
　　按照GB/T 19495.7 中规定的方法执行。
　　6.2 制样
　　6.2.1 马铃薯块茎、生薯条、生薯片、植株样品的制备
　　对于同一个批次的马铃薯块茎、生薯条、生薯片、植株样品，把每一个样品洗净，在任意部位用小刀切下约1cm³的样品，用液氮研磨成粉末制成小样，然后将所有小样混匀，取1g用于提取DNA。
　　6.2.2 马铃薯淀粉样品的制备
　　把每包取样的120g淀粉充分混合，从中取1g作为小样，然后将所有小样在一起充分混匀，取1g用于提取DNA。