NY/T 1381-2007 辣椒素的测定 高效液相色谱法检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了辣椒素的高效液相色谱测定方法。
　　本标准适用于辣椒及以其为原料生产食品中的辣椒素、二氢辣椒素含量的测定。
　　本方法的检出限辣椒素为0.13mg/kg，二氢辣椒素为0.04mg/kg。
　　本方法的线性范围辣椒素为0.10mg/L~160mg/L，二氢辣椒素为0.04mg/L~160mg/L。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
　　3 原理
　　试样经甲醇四氢呋喃溶液提取，过微孔滤膜，进样，用反相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
　　4 试剂和材料
　　除非另有规定，仅使用色谱纯试剂，实验用水应符合GB/T 6682 一级水的要求。
　　4.1 甲醇(CH3OH)
　　4.2 四氢呋喃(C4H80)。
　　4.3 甲醇四氢呋喃溶液(1+1)：取200mL甲醇和200mL四氢呋喃混合均匀备用。
　　4.4 无水硫酸钠(NaSO4)，分析纯，用前400℃烘干30min，磨碎。
　　4.5 辣椒素标准品，纯度大于95%。
　　4.6 二氢辣椒素标准品，纯度大于90%。
　　4.7 辣椒素标准储备液称取0.0100g辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，辣椒素质量浓度为200mg/L。
　　4.8 二氢辣椒素标准储备液：称取0.0100g二氢辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，二氢辣椒素质量浓度为200mg/L。
　　5 仪器和设备
　　5.1 高效液相色谱仪：带荧光检测器。
　　5.2 天平：感量±0.001g、±0.01g
　　5.3 超声波提取器。
　　5.4 组织捣碎机。
　　5.5 电动磨碎机。
　　5.6 恒温水浴锅。
　　5.7 滤膜：0.45μm，有机相。
　　6 分析步骤
　　6.1 提取
　　6.1.1 辣椒粉、干辣椒及固态辣椒制品
　　将样品用电动磨碎机磨碎，称取0.2g*到0.0001g，于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，在60℃水浴条件下，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。将滤渣连同滤纸重新用25mL甲醇四氢呋喃溶液经超声波提取器提取10min后，再重复一次。将三次过滤收集的滤液合并，在70℃~75℃恒温水浴下浓缩至30mL左右，转移至50mL容量瓶，用甲醇-四氢呋喃溶液定容。经0.45μm有机相滤膜过滤后进行色谱分析。根据试样中的辣椒素含量，必要时进行稀释，使试样中辣椒素含量在0.13mg/L~160mg/L之间，二氢辣椒素含量在0.04mg/L~160mg/L范围内。
　　6.1.2 鲱辣椒、辣椒酱及含水量较高的辣椒制品
　　将样品用组织捣碎机捣碎，称取10.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加人3.0g无水硫酸钠，25mL甲醇四氢呋喃溶液，震摇，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
　　6.1.3 辣椒油等油状制品
　　将样品用组织捣碎机均质，称取2.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
　　6.2 色谱参考条件
　　色谱柱：C18 150mm×4.6mm，粒径5μm。
　　流动相：甲醇+水=80+20，用前过0.45m滤膜，脱气。
　　流速：0.6mL/min。
　　荧光检测器激发波长229nm，发射波长320mm。
　　进样量10μL。
　　6.3 标准曲线的绘制
　　将辣椒素、二氢辣椒素标准储备液分别用甲醇稀释成质量浓度为0.2mg/L1mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mgL和160mg/L系列标准工作溶液，按6.2色谱条件测定。以辣椒素、二氢辣椒素质量浓度为纵坐标，相应的峰面积积分值为横坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。
　　6.4 试液的测定
　　将制备好的试液在6.2色谱条件下测定，做单点或多点校准，以峰面积积分值定量。
　　7 结果计算与表述
　　试样中辣椒素、二氢辣椒素含量以质量分数v计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式(1)计算：