NY/T 2643-2014 大蒜及制品中蒜素的测定 高效液相色谱法检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了大蒜及制品(蒜粉、蒜片)中蒜素(二烯丙基硫代亚磺酸酯)含量的高效液相色谱测定方法。
　　本标准适用于大蒜及制品(蒜粉、蒜片)中二烯丙基硫代亚磺酸酯含量的测定。
　　本标准方法的检出限*低检出量为50ng，用于色谱分析的试样质量为3g时，*低检出浓度为16.7mg/kg。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
　　3 原理
　　试样经破碎、用水提取后，用带有紫外检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。
　　4 试剂
　　除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T 6682 中规定的一级水。
　　4.1 甲醇(CH3OH)，色谱纯。
　　4.2 甲酸(CHOOH)，色谱纯。
　　4.3 乙腈(CH3CN)，色谱纯。
　　4.4 甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸于1000mL容量瓶，用水稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤。
　　4.5 甲醇溶液：取50mL甲醇，加入50mL水，混匀。
　　4.6 二烯丙基硫代亚磺酸酯标准品(C6H10OS2，CAS 539-86-6)。
　　4.7 二烯丙基硫代亚磺酸酯标准储备溶液：准确称取一定量的二烯丙基硫代亚磺酸酯标准品，用甲醇溶液(4.5)将其配制成质量浓度约为500mg/L的标准储备溶液，该溶液于-20℃以下冷冻保存，有效期为6个月。
　　5 仪器
　　5.1 液相色谱仪，配有紫外或二*管阵列检测器。
　　5.2 分析天平，感量±0.1mg和感量±1mg。
　　5.3 食品捣碎机。
　　5.4 高速均质仪，转速大于6000r/min。
　　5.5 离心机，转速大于8000r/min。
　　5.6 实验磨
　　5.7 试验筛筛孔尺寸710μm。
　　6 试样的制备
　　6.1 鲜蒜：取有代表性的大蒜样品可食部分，混匀缩分后，按质量比1：1加水，用食品捣碎机粉碎制成蒜泥，作为试样，立即按7.1处理并测定。
　　6.2 蒜粉：通过710m试验筛混匀，作为试样，于室温下保存。
　　6.3 蒜片：用实验磨粉碎，通过710m试验筛混匀，作为试样，于室温下保存。
　　7 分析步骤
　　7.1 试样处理
　　称取鲜蒜试样3g(*到1mg)或蒜粉(片)试样.5g(*到.lmg)于100mL具塞锥形瓶中，用量筒准确加入50mL水，用高速均质仪高速匀浆2min，全部转移至50mL离心管中，8000r/min离5min.  取上清液过0.45μm滤膜，得到待测液，供高效液相色谱测定。
　　7.2 色谱参考条件
　　色谱柱：C18，250mm×4.6mm，5μm，或相当规格色谱柱；
　　流动相：乙腈(4.3)和甲酸溶液(4.4)，梯度洗脱程序见表1；
　　流速：1.0mL/min；
　　进样量：10μL；
　　柱温：40℃；
　　检测波长：245nm。
　　7.3 标准工作曲线的制作
　　准确吸取一定量的二烯丙基硫代亚磺酸酯标准储备液(4.7)，用水配制成质量浓度约为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L的系列标准工作溶液按照色谱参考条件测定，以二烯丙基硫代亚磺酸酯质量浓度为横坐标，相应的积分峰面积为纵坐标，计算标准工作曲线或求线性回归方程。该标准工作溶液应现用现配。
　　7.4 测定
　　做两份试料的平行测定。分别取适量待测液和相应质量浓度的标准工作溶液，作单点校准或多点校准，以色谱峰面积定量。待测液和标准工作溶液中的二烯丙基硫代亚磺酸酯的响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，蒜素标准溶液的色谱图和紫外光谱图参见附录A。