SN/T 2426-2010 进出口粮谷中桔霉素含量检测方法 液相色谱法检测标准

  1 范围
  本标准规定了进出口粮谷中桔霉素含量液相色谱检测方法。
  本标准适用于进出口大米、大麦、燕麦、小麦中桔霉素含量的检测。
  2 方法提要
  用乙腈-异丙醇水的混合溶液提取试样中桔霉素,C18固相萃取小柱净化,用配荧光检测器的液相色谱仪测定,外标法定量。
  3 试剂和材料
  除另有规定外,试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相当纯度的水。
  3.1 异丙醇:色谱纯。
  3.2 乙腈:色谱纯。
  3.3 磷酸:优级纯。
  3.4 提取溶剂:乙腈-异丙醇-水(35+10+55,体积比),用磷酸调pH为1.5。
  3.5 磷酸溶液:取5.6mL磷酸,以水定容至1000mL。
  3.6 流动相:乙腈-异丙醇-0.08mol/L磷酸(35+10+55,体积比)。
  3.7 C18固相萃取柱:500mg,3mL,或相当者。使用前分别用5mL甲醇和5mL水预淋洗并保持柱体湿润。
  3.8 桔霉素标准物质(citrinin,Cl3H14O3,CAS编号:518-75-2):纯度大于等于97%。
  3.9 桔霉素标准储备液:称取适量桔霉素标准物质,用乙腈溶解并定容至1.0mg/mL,O℃~4℃保存。
  3.10 桔霉素标准工作液:根据需要用流动相将标准储备液稀释成25ng/mL、50ng/mL、1O0ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的标准工作溶液。
  3.11 玻璃纤维滤纸:直径1lcm,孔径1.5μm。
  4 仪器和设备
  4.1 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。
  4.2 振荡器。
  4.3 离心机:4000r/min。
  4.4 真空固相萃取装置。
  4.5 氮吹仪。
  4.6 分析天平。
  5 试样制备和保存
  取有代表性样品500g,用粉碎机粉碎并通过830μm圆孔筛,混匀,分成两份,装入洁净容器内,密封并标识。在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
  6 测定步骤
  6.1提取
  称取试样约5g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加10ml提取溶剂(3.4),在振荡器上振荡提取30min。于3500r/min离心4min,上清液转入另一离心管中。在残渣中再加入5mL提取溶剂(3.4),重复上述操作,合并上清液。在提取液中加水至4omL,并用磷酸调pH为1.5,过玻璃纤维滤纸(3.11),待净化。
  6.2 净化
  将上述溶液过预淋洗好的C18固相萃取柱,用5mL水淋洗柱子。待淋洗液全部流岀柱子后,减压抽干3min。用l0ml甲醇以1.0mL/min的速度洗脱,收集全部洗脱液,在40℃下,N2吹干,再以1.0mL流动相溶解,过0.2μm滤膜,供液相色谱测定。
  6.3 测定
  6.3.1 液相色谱条件
  a) 色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm(内径),粒径5μm,或相当者;
  b) 流动相:乙腈-异丙醇-0.08mol/L磷酸(35+10+55,体积比);
  c) 流速:1.0mL/min;
  d) 进样量:50μL;
  e) 柱温:28℃;
  f) 检测波长:Ex=331nm,Em=500nm。
  6.3.2 色谱测定
  根据样液中被测桔霉素含量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作液和样液中桔霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下,桔霉素保留时间约为9.1min,标准物质色谱图参见附录A中图A.1。
  6.3.3 空白试验
  除不加试样外,均按上述操作步骤进行。
  7 结果计算和表述
  用色谱数据处理软件或按式(1)计算试样中桔霉素含量,计算结果需将空白值扣除:
  式中:
  X——试样中桔霉素含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
  A——样液中桔霉素的峰面积;
  As——标准工作液中桔霉素的峰面积;
  c——标准工作液中桔霉素的浓度,单位为微克每毫升(g/mL)
  V——样液最终定容体积,单位为毫升(mL);
  m-——最终样液所代表的试样量,单位为克(g)。
  8 测定低限、回收率
  8.1 测定低限
  本方法的测定低限为0.01mg/kg。
  8.2 回收率
  粮谷中桔霉素检测的添加回收率数据见表1。


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