NY/T 1286-2007 花生黄曲霉毒素B1检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了采用高效液相色谱法测定花生黄曲霉毒素B1含量的方法。
　　本标准适用于花生中黄曲霉毒素B1的测定。
　　本方法检出限为1.0μg/kg。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
　　GB 5491 粮食、油料检验扦样、分样法
　　GB 6682 实验室用水规定(GB 6682-1992，eqv ISO 3696-1987)
　　3 原理
　　样品中黄曲霉毒素B1经提取浓缩、衍生化，反相C18柱分离后，在激发波长365mm，荧光波长440nm检测，外标法定量，计算样品黄曲霉毒素B1含量。
　　4 试剂
　　下列试剂除注明外均为分析纯，水为GB 6682 规定的二级水。
　　4.1 甲醇，色谱纯。
　　4.2 乙腈，色谱纯。
　　4.3 甲醇溶液(含4%氯化钠)，称取4g氯化钠(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL水的混合溶液。
　　4.4 三氟乙酸。
　　4.5 石油醚(60℃~90℃)。
　　4.6 三氯甲烷。
　　4.7 黄曲霉毒素B1标准储备液，10mg/L。
　　5 仪器设备
　　5.1 天平，感量±1mg。
　　5.2 切片机。
　　5.3 粉碎机。
　　5.4 旋涡混合器。
　　5.5 超声波清洗器，功率不低于50W。
　　5.6 干热氮吹仪，控温精度50℃±2℃。
　　5.7 中速定性滤纸。
　　5.8 烘箱，控温精度50℃±2℃。
　　5.9 0.45μm有机相滤膜。
　　5.10 Nova-pak C18色谱柱(3.9mm×150mm)。
　　5.11 液相色谱仪(带荧光检测器)。
　　6 取样
　　按GB 5491 执行。
　　7 试样的制备
　　样品中的水分及挥发物含量超过10%时，在45℃左右的条件下通风干燥。将干燥的花生样品在切片机中切片至0.5mm左右，再经粉碎机粉碎，过0.42mm筛。
　　8 分析步骤
　　8.1 提取
　　称取20g(*至10mg)样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加60mL甲醇溶液(4.3)。50℃±2℃水浴超声提取5min(每隔1min取出旋涡混合1次)，过双层中速定性滤纸(5.7)，收集滤液于小烧杯中取滤液10mL于试管a中，加入5mL石油醚(4.5)，旋涡混合30s，静置2min，待分层后，弃上层，取下层溶液5mL于试管b中，加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取出上层于试管c中，再加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取上层。合并两次提取液于试管c中。
　　8.2 柱前衍生
　　将提取液置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，加入200μL衍生试剂(4.4)，盖好塞子，旋涡混合30s，50℃烘箱中衍生5min，置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，用1mL流动相溶解，过有机相滤膜(5.9)，滤液用液相色谱分析。
　　8.3 色谱分析
　　8.3.1 取黄曲霉毒素B1标准储备液(4.7)，用甲醇(4.1)稀释至20μg/L、40μg/L、80μg/L、160μg/L、320μg/L标准使用液连同样品依次进样，进行液相色谱检测，建立工作曲线。
　　8.3.2 色谱条件：流动相：乙腈+甲醇+水=13+12+75，流速：0.8mL/min，进样量10μL，柱温30℃，检测器：EX：365nm，FM：440nm
　　9 结果计算
　　试样中黄曲霉毒素B1含量以质量分数W计单位以微克每千克表示(g/kg)，按公式(1)计算：
　　W=m1×V1xD/V2×1000x1000/m          （1）
　　式中：
　　m1——从工作曲线上计算出进样体积样品中黄曲霉毒素B1质量，单位为微克(pg)；
　　V1——加入流动相体积的数值，单位为毫升(mL)；
　　V2——进样体积，单位为微升(L)；
　　D——样液的总稀释倍数；
　　m——试样质量，单位为克(g)。
　　计算结果保留小数点后一位。