SN/T 3039-2011 出口动物源性食品中安眠酮残留量的测定 高效液相色谱法检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了出口动物源性食品中安眠酮残留量检验的制样和高效液相色谐测定方法本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾和奶中安眠酮残留量的测定。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是性日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改单适用于本文件。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
　　3 方法提要
　　试样中的安眠酮用二氯甲烷提取，提取液经浓缩、固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪检测。外标法定量。
　　4 试剂和材料
　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
　　4.1 乙腈：高效液相色谐纯。
　　4.2 甲醇：高效液相色谱纯。
　　4.3 丙酮：高效液相色谱纯。
　　4.4 正已烷：高效液相色谱纯。
　　4.5 二氯甲烷：高效液相色谱纯。
　　4.6 乙酸铵。
　　4.7 氢氧化钠
　　4.8 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。
　　4.9 乙酸铵溶液(25mmol/U)：准确称取乙酸铵1.925g，用水定容至1000mL。经0.45μm水相滤膜过滤。
　　4.10 氢氧化钠(1mol/L)：称取40g氢氧化钠溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。
　　4.11 氢氧化钠(0.1mol/L)：称取4g氢氧化钠溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。
　　4.12 乙腈饱和正己烷：正己烷与足够的乙腈混合，至饱和。
　　4.13 洗脱液：乙腈+丙酮(5+5，体积比)，取50mL乙腈，加入50mL丙酮，混匀备用。
　　4.14 流动相：乙腈+25mmol/L乙酸胺(4+6，体积比)，取400mL乙腈，加入600mL25mmmol/L乙酸胺(4.9)，超声混匀备用。
　　4.15 安眠酮标准品(methaqualone，C16H14N2O，相对分子质量250.29，CAS号：340-56-7)：纯度>99.0%。
　　4.16 安眠酮标准储备液：准确移取安眠酮标准品(4.15)1.00mL，浓度为10.00mg/L，用乙腈稀释并定容至10mL，浓度为1.00mg/L，0℃~5℃冰箱保存。根据需要再配成适用浓度的标准工作溶液。
　　4.17 固相萃取柱：60mg/3m HLB：C18SPE，或其他等同效果的固相萃取柱。
　　4.18 有相机、水相针头滤膜：0.45μm。
　　5 仪器和设备
　　5.1 高效液相色谱仪带紫外可见波长检测器或二*管阵列检测器。
　　5.2 离心机：转速不低干4000r/min。
　　5.3 旋转蒸发仪。
　　5.4 分析天平：感量0.0001g。
　　5.5 涡旋振荡器。
　　5.6 匀浆机。
　　5.7 肉类组织粉碎机。
　　5.8 超声波水浴。
　　5.9 固相萃取装置
　　5.10 离心管：50mL，5mL。
　　6 样品的制备和保存
　　取样品去皮去筋约500g，用肉类组织粉碎机绞碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。试样置于-18℃以下保存，奶试样置于0℃~4℃以下保存。
　　7 提取和净化
　　7.1 提取
　　7.1.1 肌肉组织、肝脏、肾脏等
　　称取5g(*到0.01g)组织样品和10g无水硫酸钠(4.8)于50mL离心管中，加人1mL 1mol/L氢氧化钠和20mL二氯甲烷提取液，均质提取1min，4000r/min离心5min，上清液经快速定性滤纸过滤到100mL浓缩瓶中，残渣用20mL二氯甲烷超声提取10min，4000/min离心5min，合并二氯甲烷，40℃旋转蒸发至干。残留物(7.1.1)中加人1mL流动相(4.14)，充分涡旋振荡，转移至5mL离心管中，加入3mL乙腈饱和正己烷(4.12)，涡旋混匀，4000r/min离心5min，弃去上层正已烷层，原离心管中再加入3mL乙腈饱和正己烷，涡旋混匀，4000r/min离心5min，下层加0.1mol/L的氢氧化钠稀释至5mL作待净化液。
　　7.1.2 奶类等
　　称取2g(*到0.01g)试样于50mL离心管中，加入1mL1mol/L氢氧化钠和20mL二氯甲烷提取液，超声提取10min，再振荡提取10min，4000r/min离心5min，上清液经快速定性滤纸过滤到100mL浓缩瓶中，用二氯甲烷定容到20mL，移取5mL滤液，加人5mL水混匀后作待净化液。
　　7.2 净化
　　用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L的氢氧化钠以lmL/min的流速淋洗活化萃取柱(4，17)，然后将待净化液通过柱子(控制流速小于0.5mL/min)，依次用3mL 0.1mol/L的氢氧化钠、3mL甲醇以1mL/min的流速过柱淋洗，*后用5mL洗脱液(4.13)洗脱(控制流速小于0.5mL/min)，收集洗脱液于25mL浓缩瓶中，40℃旋转蒸发至干，加1mL流动相(4.14)溶解残渣，溶液过0.45m有机相针头滤膜后进行高效液相色谱仪测定。