SN/T 0168-2015 进出口食品中菌落总数检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了进出口食品中需氧菌及兼性厌氧菌的菌落总数计数方法。
　　本标准适用于各种进出口食品及其原料，有专门规定检验方法的除外。其他产品可参考使用本标准。
　　2 术语和定义
　　下列术语和定义适用于本文件。
　　菌落总数 aerobic plate counts；APC
　　食品检样经过处理，在一定条件(如合适的培养基、温度、时间等)下培养后，所得1mL(或1g)检样形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下所得的结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌的菌落总数。
　　注：菌落总数是指产品中所有需氧微生物含量的高低，是衡量产品受污染程度的一项重要指标。
　　2.2 估计值 estimation of aerobic plate counts；EAPC
　　平板菌落计数的估计值。
　　2.3 菌落形成单位 colony-forming units；CFU
　　个细菌在平板计数琼脂培养基上生长形成肉眼可见的菌落。
　　2.4 多不可计 too numerous to count；TNTC
　　平板上的菌落数太多而无法计数。
　　2.5 实验室事故 laboratory accident；LA
　　实验过程污染等导致结果无效的情况。
　　3 环境、设备和材料
　　3.1 环境要求：实验室环境要求干浄、光照充足、通风良好，工作台要平稳且台面面积足够大。需定期对工作区域内空气中的微生物密度进行监测，可将倾注有琼脂的平皿在空气中暴露15min后放培养箱(36℃±1℃)中进行培养，48h后每个平皿上的菌落不能超过15个。
　　3.2 均质器和均质袋或均质杯。
　　3.3 天平：感量0.1g。
　　3.4 剪刀、镊子、刀子、叉子或大汤勺：各实验室可根据自己的爱好选择，方便取样即可。
　　3.5 玻璃平皿或塑料平皿：建议使用15mm×90mm的平皿。
　　3.6 灭菌吸管或移液器：量程分别为1mL、5mL和10mL，刻度为0.1mL。
　　3.7 带橡胶塞或塑料螺旋帽的玻璃稀释瓶：容量200mL。
　　3.8 恒温水浴箱：45℃±1℃，用来融化凝固的琼脂用。
　　3.9 恒温培养箱：36℃±1℃。
　　3.10 冰箱：0℃~5℃。
　　3.11 冰柜：-20℃~-15℃。
　　3.12 合适温度范围的温度计(已计量)。
　　4 培养基、试剂
　　4.1 平板计数琼脂(参见附录A.1)。
　　4.2 磷酸盐缓冲稀释液(参见附录A.2)。
　　4.3 无菌生理盐水(参见附录A.3)。
　　4.4 1mol/L氢氧化钠(NaOH)：称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中。
　　5 程序
　　5.1 样品制备
　　以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
　　5.2 制备样品匀液
　　5.2.1 固体或半固体样品：以无菌操作，取25g或25mL样品(根据样品分布的均匀性程度，也可酌情增减样品量，如50g或5σmL等)，放入装有225mL稀释剂(磷酸盐缓冲稀释液或无菌生理盐水，以下同)的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL稀释剂的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1：10的样品匀液。如样品均质时间超过2min，应在均质杯外加冰水冷却。
　　5.2.2 干燥或干粉食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500m稀释瓶中。迅速振摇，将样品混匀，制成1：10的样品匀液。振摇时，幅度为30cm，7s内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。
　　5.2.3 液体样品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放人装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中，按5.2.2中所述方法迅速振摇，制成1：10的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2s~4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。
　　5.3 稀释样品均液
　　5.3.1 取此样品匀液1mL加到9mL的稀释剂中，并以此类推，分别制成10-2，10-3，10-4三个连续稀释度或其他合适稀释度的样品匀液，每个稀释度换用一个新的无菌吸管。
　　5.3.2 所有样品匀液都要在7s内沿直径30cm的弧线摇动25次，摇动时要避免产生泡沫。
　　5.4 平板接种
　　5.4.1 每个稀释度的样品匀液各取1mL注人一个平皿，一式两份，平皿预先要做适当的标记。如果样品匀液在吸取前静置时间超过了3min，要按上述方法再次摇动。
　　5.4.2 在原始样品稀释液制备后的15min内，每个平皿中注人12mL~15mL平板计数琼脂(预先已放于45℃±1℃的水浴中恒温)，即每个样品从开始稀释到倾注*后一个平皿所用的时间不得超过15min。每个稀释度的样品分别制两个琼脂平板。